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混合研磨仪在苯酚-硫酸法测多糖中的前处理应用探讨

日期:2019-04-26 23:14
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摘要:<p class="MsoNormal"> <b><br /> </b> </p> <p class="MsoNormal"> <b><br /> </b> </p> <p class="MsoNormal"> <b><br /> </b> </p> <p class="MsoNormal"> <b><span style="display:inline-block;position:relative;"> </span></b> </p> <div style="top:0px;left:0px;right:0px;bottom:0px;background-color:rgba(0, 0, 0, 0.4);position:absolute;margin-left:100%;"> </div> <b><img src="http://zt.yizimg.com/ComFolder/498432/image/201803/201803281413417211.png" /><br /> </b> <p> <br /> </p> <p class="MsoNormal"> <b><br /> </b> </p> <p class="MsoNormal"> <b><br /> </b> </p> <p class="MsoNormal"> <b><br /> </b> </p> <p class="MsoNormal"> <b><span style="font-size:16px;">应用行业</span></b><span style="font-size:16px;">:</span><span></span> </p> <p class="MsoNormal" style="text-indent:21.0pt;"> <span style="font-size:16px;">食品药品、农业、生物、医学、法医检验等</span><span></span> </p> <p class="MsoNormal"> <b><span style="font-size:16px;">测定原理:</span><span></span></b> </p> <p class="MsoNormal" style="text-indent:21.0pt;"> <span style="font-size:16px;">多糖在浓硫酸的作用下先水解成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,然后与苯酚生成橙黄色化合物,再以</span><span><a href="https://baike.so.com/doc/5327894-5563066.html" target="https://baike.so.com/doc/_blank"><span style="font-size:16px;">比色法</span></a></span><span style="font-size:16px;">测定</span><span></span> </p> <p class="MsoNormal"> <b><span style="font-size:16px;">所需试剂:</span><span></span></b> </p> <p style="text-indent:21.0pt;background:white;"> <span style="font-size:16px;">1.&nbsp;</span><a href="https://baike.so.com/doc/1155604-1222428.html" target="https://baike.so.com/doc/_blank"><span style="font-size:16px;">浓硫酸</span></a><span style="font-size:16px;">:分析纯,</span><span style="font-size:16px;">95.5%</span> </p> <p style="text-indent:21.0pt;background:white;"> <span style="font-size:16px;">2. 80%苯酚</span><span style="font-size:16px;">:80</span><span style="font-size:16px;">克苯酚</span><span style="font-size:16px;">(</span><span style="font-size:16px;">分析纯重蒸馏试剂</span><span style="font-size:16px;">)</span><span style="font-size:16px;">加</span><span style="font-size:16px;">20</span><span style="font-size:16px;">克水使之溶解,可置冰箱中避光长期储存。</span> </p> <p style="text-indent:21.0pt;background:white;"> <span style="font-size:16px;">3. 6%苯酚</span><span style="font-size:16px;">:</span><span style="font-size:16px;">临用前以</span><span style="font-size:16px;">80%</span><span style="font-size:16px;">苯酚配制。</span><span style="font-size:16px;">(</span><strong><span style="font-size:16px;">每次测定均需现配</span></strong><span style="font-size:16px;">)</span> </p> <p style="text-indent:21.0pt;background:white;"> <span style="font-size:16px;">4. 标准</span><span><a href="https://baike.so.com/doc/5415677-5653822.html" target="https://baike.so.com/doc/_blank"><span style="font-size:16px;">葡聚糖</span></a><span style="font-size:16px;">(Dextran,</span><a href="https://baike.so.com/doc/802234-848645.html" target="https://baike.so.com/doc/_blank"><span style="font-size:16px;">瑞典</span></a><span style="font-size:16px;">Pharmacia),</span></span><span style="font-size:16px;">或分析纯葡萄糖。</span><span></span> </p> <p style="text-indent:21.0pt;background:white;"> <span style="font-size:16px;">5. 15%</span><a href="https://baike.so.com/doc/5243345-7117737.html" target="https://baike.so.com/doc/_blank"><span style="font-size:16px;">三***</span></a><span style="font-size:16px;">(15%TCA):15克</span><span style="font-size:16px;">TCA</span><span style="font-size:16px;">加</span><span style="font-size:16px;">85</span><span style="font-size:16px;">克水使之溶解,可置冰箱中长期储存。</span><span></span> </p> <p style="text-indent:21.0pt;background:white;"> <span style="font-size:16px;">6. 5%三***</span><span style="font-size:16px;">(5%TCA):25</span><span style="font-size:16px;">克</span><span style="font-size:16px;">TCA</span><span style="font-size:16px;">加</span><span style="font-size:16px;">475</span><span style="font-size:16px;">克水使之溶解,可置冰箱中长期储存。</span> </p> <p style="text-indent:21.0pt;background:white;"> <span style="font-size:16px;">7. 6mol/L 氢氧化钠</span><span style="font-size:16px;">:120</span><span style="font-size:16px;">克分析纯氢氧化钠溶于</span><span style="font-size:16px;">500ml</span><span style="font-size:16px;">水。</span> </p> <p style="text-indent:21.0pt;background:white;"> <span style="font-size:16px;">8. 6mol/L 盐酸</span> </p> <p style="text-indent:21.0pt;background:white;"> <b><span style="font-size:16px;">操作步骤:</span><span></span></b> </p> <p style="text-indent:21.0pt;background:white;"> <span style="font-size:16px;">1.制作标准曲线</span><span style="font-size:16px;">:</span><span style="font-size:16px;">准确称取标准葡聚糖</span><span style="font-size:16px;">(</span><span style="font-size:16px;">或葡萄糖</span><span style="font-size:16px;">)20mg</span><span style="font-size:16px;">于</span><span style="font-size:16px;">500ml</span><span style="font-size:16px;">容量瓶中,加水至刻度,分别吸取</span><span style="font-size:16px;">0.4</span><span style="font-size:16px;">、</span><span style="font-size:16px;">0.6</span><span style="font-size:16px;">、</span><span style="font-size:16px;">0.8</span><span style="font-size:16px;">、</span><span style="font-size:16px;">1.0</span><span style="font-size:16px;">、</span><span style="font-size:16px;">1.2</span><span style="font-size:16px;">、</span><span style="font-size:16px;">1.4</span><span style="font-size:16px;">、</span><span style="font-size:16px;">1.6</span><span style="font-size:16px;">及</span><span style="font-size:16px;">1.8ml,</span><span style="font-size:16px;">各以蒸馏水补至</span><span style="font-size:16px;">2.0ml</span><span style="font-size:16px;">,然后加入</span><span style="font-size:16px;">6%</span><span style="font-size:16px;">苯酚</span><span style="font-size:16px;">1.0ml</span><span style="font-size:16px;">及</span><span><a href="https://baike.so.com/doc/1155604-1222428.html" target="https://baike.so.com/doc/_blank"><span style="font-size:16px;">浓硫酸</span></a><span style="font-size:16px;">5.0ml,</span></span><span style="font-size:16px;">摇匀冷却,沸水浴显色</span><span style="font-size:16px;">15min</span><span style="font-size:16px;">以后于</span><span style="font-size:16px;">490nm</span><span style="font-size:16px;">测光密度,以</span><span style="font-size:16px;">2.0ml</span><span style="font-size:16px;">水按同样显色操作为空白,横坐标为多糖微克数,纵坐标为光密度值,得标准曲线。</span> </p> <p style="text-indent:21.0pt;background:white;"> <span style="font-size:16px;">2.样品含量测定</span><span style="font-size:16px;">:</span> </p> <p style="text-indent:21.0pt;background:white;"> <span style="font-size:16px;">①取样品</span><span style="font-size:16px;">1</span><span style="font-size:16px;">克</span><span style="font-size:16px;">(</span><span style="font-size:16px;">湿样</span><span style="font-size:16px;">)</span><span style="font-size:16px;">,置于</span><span style="font-size:16px;">10ml PTFE</span><span style="font-size:16px;">密封离心管中,加入</span><span style="font-size:16px;">5mm</span><span style="font-size:16px;">、</span><span style="font-size:16px;">3mm</span><span style="font-size:16px;">氧化锆磨球,加</span><span style="font-size:16px;">15%TCA</span><span style="font-size:16px;">溶液</span><b><span style="font-size:16px;">(注意</span><span style="font-size:16px;">:</span><span style="font-size:16px;">总的溶液不要超出</span><span style="font-size:16px;">10</span><span style="font-size:16px;">毫升,不要超出离心管的容量</span><span style="font-size:16px;">)</span><span style="font-size:16px;">,</span></b><span style="font-size:16px;">将每个适配器上均装满</span><span style="font-size:16px;">6</span><span style="font-size:16px;">个编号的</span><span style="font-size:16px;">10ml</span><span style="font-size:16px;">带液</span><span style="font-size:16px;">PTFE</span><span style="font-size:16px;">离心管,</span><span style="font-size:16px;">TJ2011</span><span style="font-size:16px;">高通量混合研磨仪设定转速</span><span style="font-size:16px;">1400rpm</span><span style="font-size:16px;">,研磨时间</span><span style="font-size:16px;">3min</span><span style="font-size:16px;">(视物料软硬情况定,一般不超过</span><span style="font-size:16px;">5min</span><span style="font-size:16px;">)</span><span></span> </p> <p style="text-indent:21.0pt;background:white;"> <span style="font-size:16px;">②离心,转速</span><span style="font-size:16px;">3000</span><span style="font-size:16px;">转</span><span style="font-size:16px;">/</span><span style="font-size:16px;">分钟,共三次。**次</span><span style="font-size:16px;">15</span><span style="font-size:16px;">分钟,取上清液。后两次各</span><span style="font-size:16px;">5</span><span style="font-size:16px;">分钟取上清液到</span><span style="font-size:16px;">25</span><span style="font-size:16px;">毫升锥形比色管中。*后滤液保持</span><span style="font-size:16px;">18</span><span style="font-size:16px;">毫升左右(</span><b><span style="font-size:16px;">TJ2011</span><span style="font-size:16px;">高通量混合研磨仪能量大,速度快,动植物组织会在</span><span style="font-size:16px;">3min</span><span style="font-size:16px;">之内全部打碎,不存在大残渣,直接离心即可,避免了二次转移产生污染)</span></b> </p> <p style="text-indent:21.0pt;background:white;"> <span style="font-size:16px;">③水浴,在向比色管中加入</span><span style="font-size:16px;">2</span><span style="font-size:16px;">毫升</span><span style="font-size:16px;">6mol/L </span><span style="font-size:16px;">盐酸之后摇匀,在</span><span style="font-size:16px;">96</span><span style="font-size:16px;">℃水浴锅中水浴</span><span style="font-size:16px;">2</span><span style="font-size:16px;">小时。</span> </p> <p style="text-indent:21.0pt;background:white;"> <span style="font-size:16px;">④</span><span><a href="https://baike.so.com/doc/6730606-6944905.html" target="https://baike.so.com/doc/_blank"><span style="font-size:16px;">定容</span></a></span><span style="font-size:16px;">取样。水浴后,用流水冷却后加入</span><span style="font-size:16px;">2</span><span style="font-size:16px;">毫升</span><span style="font-size:16px;">6mol/L </span><span style="font-size:16px;">氢氧化钠摇匀。定容至</span><span style="font-size:16px;">25</span><span style="font-size:16px;">毫升的容量瓶中。吸取</span><span style="font-size:16px;">0.2 ml</span><span style="font-size:16px;">的样品液,以蒸馏补至</span><span style="font-size:16px;">2.0ml</span><span style="font-size:16px;">,然后加入</span><span style="font-size:16px;">6%</span><span style="font-size:16px;">苯酚</span><span style="font-size:16px;">1.0ml</span><span style="font-size:16px;">及浓硫酸</span><span style="font-size:16px;">5.0ml,</span><span style="font-size:16px;">摇匀冷却室温放置</span><span style="font-size:16px;">20</span><span style="font-size:16px;">分钟以后于</span><span style="font-size:16px;">490nm</span><span style="font-size:16px;">测光密度。每次测定取双样对照。以</span><span><a href="https://baike.so.com/doc/349452-370154.html" target="https://baike.so.com/doc/_blank"><span style="font-size:16px;">标准曲线</span></a></span><span style="font-size:16px;">计算多糖含量。</span><span></span> </p> <p style="text-indent:21.0pt;background:white;"> <span style="font-size:16px;"><span style="display:inline-block;position:relative;"> <div style="top:0px;left:0px;right:0px;bottom:0px;background-color:rgba(0, 0, 0, 0.4);position:absolute;margin-left:100%;"> </div> <img src="http://zt.yizimg.com/ComFolder/498432/image/201803/201803291515917151.png" /></span><br /> </span> </p> <p class="MsoNormal"> <br /> </p>









应用行业

食品药品、农业、生物、医学、法医检验等

测定原理:

多糖在浓硫酸的作用下先水解成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,然后与苯酚生成橙黄色化合物,再以测定

所需试剂:

1。 :分析纯,95.5%

2。 80%苯酚:80克苯酚(分析纯重蒸馏试剂)20克水使之溶解,可置冰箱中避光长期储存。

3. 6%苯酚:临用前以80%苯酚配制。(每次测定均需现配)

4. 标准(Dextran,Pharmacia),或分析纯葡萄糖。

5. 15%(15%TCA):15克TCA85克水使之溶解,可置冰箱中长期储存。

6。 5%三***(5%TCA):25TCA475克水使之溶解,可置冰箱中长期储存。

7. 6mol/L 氢氧化钠:120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水。

8. 6mol/L 盐酸

操作步骤:

1.制作标准曲线:准确称取标准葡聚糖(或葡萄糖)20mg500ml容量瓶中,加水至刻度,分别吸取0.40.60.81.01.21.41。61.8ml,各以蒸馏水补至2.0ml,然后加入6%苯酚1.0ml5.0ml,摇匀冷却,沸水浴显色15min以后于490nm测光密度,以2.0ml水按同样显色操作为空白,横坐标为多糖微克数,纵坐标为光密度值,得标准曲线。

2.样品含量测定:

①取样品1(湿样),置于10ml PTFE密封离心管中,加入5mm3mm氧化锆磨球,加15%TCA溶液(注意:总的溶液不要超出10毫升,不要超出离心管的容量)将每个适配器上均装满6个编号的10ml带液PTFE离心管,TJ2011高通量混合研磨仪设定转速1400rpm,研磨时间3min(视物料软硬情况定,一般不超过5min

②离心,转速3000/分钟,共三次。**次15分钟,取上清液。后两次各5分钟取上清液到25毫升锥形比色管中。*后滤液保持18毫升左右(TJ2011高通量混合研磨仪能量大,速度快,动植物组织会在3min之内全部打碎,不存在大残渣,直接离心即可,避免了二次转移产生污染)

③水浴,在向比色管中加入2毫升6mol/L 盐酸之后摇匀,在96℃水浴锅中水浴2小时。

取样。水浴后,用流水冷却后加入2毫升6mol/L 氢氧化钠摇匀。定容至25毫升的容量瓶中。吸取0。2 ml的样品液,以蒸馏补至2。0ml,然后加入6%苯酚1。0ml及浓硫酸5。0ml,摇匀冷却室温放置20分钟以后于490nm测光密度。每次测定取双样对照。以计算多糖含量。



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